ఆస్టియో ఆర్థరైటిస్ (OA) అనేది 65 ఏళ్లు పైబడిన వృద్ధులను ప్రభావితం చేసే దీర్ఘకాలిక క్షీణత ఎముక కీళ్ల వ్యాధులలో ఒకటి [
1]. సాధారణంగా, OA రోగులకు దెబ్బతిన్న మృదులాస్థి, ఎర్రబడిన సైనోవియం మరియు కోతకు గురైన కాండ్రోసైట్‌లు ఉన్నట్లు నిర్ధారణ అవుతుంది, ఇవి నొప్పి మరియు శారీరక బాధను కలిగిస్తాయి [
2]. కీళ్లలో మృదులాస్థి క్షీణత వల్ల ఆర్థరైటిస్ నొప్పి ప్రధానంగా వస్తుంది, మరియు మృదులాస్థి తీవ్రంగా దెబ్బతిన్నప్పుడు ఎముకలు ఒకదానికొకటి ఢీకొని భరించలేని నొప్పి మరియు శారీరక ఇబ్బందులకు కారణమవుతాయి [
3]. నొప్పి, వాపు మరియు కీలు దృఢత్వం వంటి లక్షణాలతో ఇన్ఫ్లమేటరీ మధ్యవర్తుల ప్రమేయం బాగా నమోదు చేయబడింది. OA రోగులలో, మృదులాస్థి మరియు సబ్‌కాండ్రల్ ఎముక కోతకు కారణమయ్యే ఇన్ఫ్లమేటరీ సైటోకిన్‌లు సైనోవియల్ ద్రవంలో కనిపిస్తాయి [
4]. OA రోగులకు సాధారణంగా కలిగే రెండు ప్రధాన ఫిర్యాదులు నొప్పి మరియు సైనోవియల్ వాపు. అందువల్ల ప్రస్తుత OA చికిత్సల ప్రాథమిక లక్ష్యాలు నొప్పి మరియు వాపును తగ్గించడం. [
5]. స్టెరాయిడ్ కాని మరియు స్టెరాయిడ్ మందులతో సహా అందుబాటులో ఉన్న OA చికిత్సలు నొప్పి మరియు వాపును తగ్గించడంలో నిరూపితమైన ప్రభావాన్ని కలిగి ఉన్నప్పటికీ, ఈ మందుల దీర్ఘకాలిక ఉపయోగాలు హృదయనాళ, జీర్ణ-ప్రేగు మరియు మూత్రపిండాల పనిచేయకపోవడం వంటి తీవ్రమైన ఆరోగ్య పరిణామాలను కలిగిస్తాయి [
6]. అందువల్ల, ఆస్టియో ఆర్థరైటిస్ చికిత్స కోసం తక్కువ దుష్ప్రభావాలతో కూడిన మరింత ప్రభావవంతమైన ఔషధాన్ని అభివృద్ధి చేయాలి.
సహజ ఆరోగ్య ఉత్పత్తులు సురక్షితంగా మరియు సులభంగా అందుబాటులో ఉండటం వల్ల బాగా ప్రాచుర్యం పొందుతున్నాయి [
7]. సాంప్రదాయ కొరియన్ మందులు ఆర్థరైటిస్‌తో సహా అనేక శోథ వ్యాధులకు వ్యతిరేకంగా నిరూపించబడ్డాయి [
8]. ఆక్లాండ్యా లప్పా డిసి. నొప్పిని తగ్గించడానికి మరియు కడుపును శాంతపరచడానికి క్వి ప్రసరణను పెంచడం వంటి ఔషధ లక్షణాలకు ప్రసిద్ధి చెందింది మరియు సాంప్రదాయకంగా సహజ అనాల్జేసిక్‌గా ఉపయోగించబడుతోంది [
9]. మునుపటి నివేదికలు A. లప్పా యాంటీ ఇన్ఫ్లమేటరీ కలిగి ఉందని సూచిస్తున్నాయి [
10,
11], నొప్పి నివారిణి [
12], క్యాన్సర్ నిరోధకం [
13], మరియు గ్యాస్ట్రోప్రొటెక్టివ్ [
14] ప్రభావాలు. A. లప్పా యొక్క వివిధ జీవసంబంధ కార్యకలాపాలు దాని ప్రధాన క్రియాశీల సమ్మేళనాల వల్ల సంభవిస్తాయి: కాస్ట్యూనోలైడ్, డీహైడ్రోకోస్టస్ లాక్టోన్, డైహైడ్రోకోస్టూనోలైడ్, కాస్టూస్లాక్టోన్, α-కాస్టోల్, సాసురియా లాక్టోన్ మరియు కాస్టూస్లాక్టోన్ [
15]. మునుపటి అధ్యయనాలు కాస్ట్యూనోలైడ్ లిపోపాలిసాకరైడ్ (LPS) లో యాంటీ ఇన్ఫ్లమేటరీ లక్షణాలను చూపించాయని పేర్కొన్నాయి, ఇది NF-kB మరియు హీట్ షాక్ ప్రోటీన్ మార్గం నియంత్రణ ద్వారా మాక్రోఫేజ్‌లను ప్రేరేపించింది [
16,
17]. అయితే, OA చికిత్స కోసం A. లప్పా యొక్క సంభావ్య కార్యకలాపాలను ఏ అధ్యయనం పరిశోధించలేదు. ప్రస్తుత పరిశోధన (మోనోసోడియం-అయోడోఅసిటేట్) MIA మరియు ఎసిటిక్ యాసిడ్-ప్రేరిత ఎలుకల నమూనాలను ఉపయోగించి OA కి వ్యతిరేకంగా A. లప్పా యొక్క చికిత్సా ప్రభావాలను పరిశోధించింది.
మోనోసోడియం-అయోడోఅసిటేట్ (MIA) జంతువులలో నొప్పి ప్రవర్తనలను మరియు OA యొక్క పాథోఫిజియోలాజికల్ లక్షణాలను ఉత్పత్తి చేయడానికి ప్రముఖంగా ఉపయోగించబడుతుంది [
18,
19,
20]. మోకాలి కీళ్లలోకి ఇంజెక్ట్ చేసినప్పుడు, MIA కాండ్రోసైట్ జీవక్రియను అస్తవ్యస్తం చేస్తుంది మరియు OA యొక్క ప్రధాన లక్షణాలైన మృదులాస్థి మరియు సబ్‌కాండ్రల్ ఎముక కోత వంటి వాపు మరియు శోథ లక్షణాలను ప్రేరేపిస్తుంది [
18]. ఎసిటిక్ ఆమ్లంతో ప్రేరేపించబడిన వ్రైటింగ్ ప్రతిస్పందన జంతువులలో పరిధీయ నొప్పి యొక్క అనుకరణగా విస్తృతంగా పరిగణించబడుతుంది, ఇక్కడ తాపజనక నొప్పిని పరిమాణాత్మకంగా కొలవవచ్చు [
19]. మౌస్ మాక్రోఫేజ్ సెల్ లైన్, RAW264.7, వాపుకు సెల్యులార్ ప్రతిస్పందనలను అధ్యయనం చేయడానికి ప్రముఖంగా ఉపయోగించబడుతుంది. LPS తో యాక్టివేషన్ తర్వాత, RAW264 మాక్రోఫేజెస్ ఇన్ఫ్లమేటరీ మార్గాలను సక్రియం చేస్తాయి మరియు TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS మరియు IL-6 వంటి అనేక ఇన్ఫ్లమేటరీ మధ్యవర్తులను స్రవిస్తాయి [
20]. ఈ అధ్యయనం MIA జంతు నమూనా, ఎసిటిక్ ఆమ్ల-ప్రేరిత జంతు నమూనా మరియు LPS- ఉత్తేజిత RAW264.7 కణాలలో OA కి వ్యతిరేకంగా A. లప్పా యొక్క యాంటీ-నోకిసెప్టివ్ మరియు యాంటీ-ఇన్ఫ్లమేటరీ ప్రభావాలను అంచనా వేసింది.
2. సామాగ్రి మరియు పద్ధతులు
2.1. మొక్కల పదార్థం
ప్రయోగంలో ఉపయోగించిన ఎ. లప్పా డిసి యొక్క ఎండిన వేరును ఎపులిప్ ఫార్మాస్యూటికల్ కో., లిమిటెడ్ (సియోల్, కొరియా) నుండి సేకరించారు. దీనిని గచోన్ విశ్వవిద్యాలయంలోని కొరియన్ మెడిసిన్ కల్నల్, హెర్బల్ ఫార్మకాలజీ విభాగం ప్రొఫెసర్ డోన్‌హున్ లీ గుర్తించారు మరియు వోచర్ నమూనా సంఖ్య 18060301 గా జమ చేయబడింది.
2.2. A. లప్పా సారం యొక్క HPLC విశ్లేషణ
A. లప్పాను రిఫ్లక్స్ ఉపకరణం (స్వేదనజలం, 100 °C వద్ద 3 గంటలు) ఉపయోగించి సంగ్రహించారు. సంగ్రహించిన ద్రావణాన్ని తక్కువ-పీడన ఆవిరిపోరేటర్ ఉపయోగించి ఫిల్టర్ చేసి ఘనీభవించారు. −80 °C కంటే తక్కువ ఉష్ణోగ్రత వద్ద ఫ్రీజ్-డ్రై చేసిన తర్వాత A. లప్పా సారం 44.69% దిగుబడిని కలిగి ఉంది. 1260 ఇన్ఫినిటీⅡ HPLC-సిస్టమ్ (ఎజిలెంట్, పాల్ ఆల్టో, CA, USA) ఉపయోగించి అనుసంధానించబడిన HPLCతో A. లప్పా యొక్క క్రోమాటోగ్రాఫిక్ విశ్లేషణ నిర్వహించబడింది. క్రోమాటిక్ విభజన కోసం, ఎక్లిప్స్XDB C18 కాలమ్ (4.6 × 250 mm, 5 µm, ఎజిలెంట్) 35 °C వద్ద ఉపయోగించబడింది. మొత్తం 100 mg నమూనాను 10 mL 50% మిథనాల్‌లో కరిగించి 10 నిమిషాలు సోనికేట్ చేశారు. నమూనాలను 0.45 μm యొక్క సిరంజి ఫిల్టర్ (వాటర్స్ కార్ప్, మిల్ఫోర్డ్, MA, USA)తో ఫిల్టర్ చేశారు. మొబైల్ దశ కూర్పు 0.1% ఫాస్పోరిక్ ఆమ్లం (A) మరియు అసిటోనిట్రైల్ (B) మరియు కాలమ్‌ను ఈ క్రింది విధంగా తొలగించారు: 0–60 నిమిషాలు, 0%; 60–65 నిమిషాలు, 100%; 65–67 నిమిషాలు, 100%; 67–72 నిమిషాలు, 0% ద్రావణి B 1.0 mL/min ప్రవాహం రేటుతో. 10 μL ఇంజెక్షన్ వాల్యూమ్ ఉపయోగించి 210 nm వద్ద ప్రసరించే ద్రవాన్ని పరిశీలించారు. విశ్లేషణను త్రిపాదిలో నిర్వహించారు.
2.3. జంతువుల నివాసం మరియు నిర్వహణ
5 వారాల వయస్సు గల మగ స్ప్రాగ్–డావ్లీ (SD) ఎలుకలు మరియు 6 వారాల వయస్సు గల మగ ICR ఎలుకలను సామ్టాకో బయో కొరియా (జియోంగ్గి-డో, కొరియా) నుండి కొనుగోలు చేశారు. జంతువులను స్థిరమైన ఉష్ణోగ్రత (22 ± 2 °C) మరియు తేమ (55 ± 10%) మరియు 12/12 గంటల కాంతి/చీకటి చక్రం ఉపయోగించి ఒక గదిలో ఉంచారు. ప్రయోగం ప్రారంభించడానికి ముందు జంతువులకు వారం కంటే ఎక్కువ కాలం పాటు ఈ పరిస్థితి గురించి అవగాహన కల్పించారు. జంతువులకు ఆహారం మరియు నీటి యొక్క యాడ్ లిబిటమ్ సరఫరా ఉంది. గచోన్ విశ్వవిద్యాలయం (GIACUC-R2019003)లో జంతు సంరక్షణ మరియు నిర్వహణ కోసం ప్రస్తుత నైతిక నియమాలను అన్ని జంతు ప్రయోగాత్మక విధానాలలో ఖచ్చితంగా పాటించారు. ఈ అధ్యయనం పరిశోధకుడి-అంధత్వం మరియు సమాంతర విచారణను రూపొందించింది. జంతు ప్రయోగాత్మక నీతి కమిటీ మార్గదర్శకాల ప్రకారం మేము అనాయాస పద్ధతిని అనుసరించాము.
2.4. MIA ఇంజెక్షన్ మరియు చికిత్స
ఎలుకలను యాదృచ్ఛికంగా 4 గ్రూపులుగా విభజించారు, అవి షామ్, కంట్రోల్, ఇండోమెథాసిన్ మరియు ఎ. లప్పా. 2% ఐసోఫ్లోరేన్ O2 మిశ్రమంతో మత్తుమందు ఇవ్వబడిన తరువాత, ఎలుకలకు 50 μL MIA (40 mg/m; సిగ్మా-ఆల్డ్రిచ్, సెయింట్ లూయిస్, MO, USA) ఉపయోగించి మోకాలి కీళ్లలోకి ఇంట్రా-ఆర్టిక్యులర్‌గా ఇంజెక్ట్ చేశారు, ఇది ప్రయోగాత్మక OAకి దారితీసింది. చికిత్సలు ఈ క్రింది విధంగా నిర్వహించబడ్డాయి: నియంత్రణ మరియు నకిలీ సమూహాలు AIN-93G ప్రాథమిక ఆహారంతో మాత్రమే నిర్వహించబడ్డాయి. ఇండోమెథాసిన్ సమూహానికి AIN-93G ఆహారంలో చేర్చబడిన ఇండోమెథాసిన్ (3 mg/kg) అందించబడింది మరియు A. లప్పా 300 mg/kg సమూహానికి A. లప్పా (300 mg/kg) తో అనుబంధించబడిన AIN-93G ఆహారం కేటాయించబడింది. OA ప్రేరణ రోజు నుండి 24 రోజుల పాటు చికిత్సలు కొనసాగించబడ్డాయి, ప్రతిరోజూ 190–210 గ్రా శరీర బరువుకు 15–17 గ్రా చొప్పున.
2.5. బరువు మోసే కొలత
OA ఇండక్షన్ తర్వాత, ఎలుకల వెనుక అవయవాల బరువు మోసే సామర్థ్యాన్ని అంచనా వేయడం షెడ్యూల్ ప్రకారం ఇన్‌కాపాసిటెన్స్-మీటర్‌టెస్టర్600 (IITC లైఫ్ సైన్స్, వుడ్‌ల్యాండ్ హిల్స్, CA, USA)తో నిర్వహించబడింది. వెనుక అవయవాలపై బరువు పంపిణీని లెక్కించారు: బరువు మోసే సామర్థ్యం (%)
